The Somatotrope axis and leptin relationshipsin vivo and in vitro studies

Resumo

En este estudio se pretende evaluar: 1,- La relación entre el estado de secreción de GH y los niveles de leptina en pacientes acrómegalicos antes y despés de seis meses de tratamiento con análogos de somatostatina. 2,- El efecto directo del eje somatotropo sobre la secreción de leptina en cultivo de tejido adiposo humano. PACIENTES, MATERIAL Y MÉTODOS 1,- CULTIVOS DE EXPLANTES Las muestras de tejido adiposo omental se obtuvieron tras intervenciones quirúrgicas abdominales. Los pacientes no estuvieron bajo ningún tipo de tratamiento conantibióticos en el momento de la cirugía abdominal y la presencia de neoplasia fue motivo de exclusión. El estudio fue aprobado por el Comité Ético del hospital y se solicitó el consentimiento de cada paciente participante en el estudio. El grupo de donantes de tejido comprendió 18 pacientes. Tras la intervención quirúrgica el tejido adiposo fue transportado inmediatamente al laboratorio bajo condiciones estériles, en una solución Krebs-Ringer-HEPES (KRH) con la siguientes composición en mM/I: NaCl, 125; KCI, 5; MgSO4, 1.2; CaCl2 2; KH2PO4, 1.2; glucosa, 6; HEPES, 25 (pH 7.4, ajustado con NaOH). Una vez el tejido en el laboratorio, se eliminaron vasos sanguíneos y tejido conectivo, se lavó con KRH, se cortó en fragmentos (300 a 400 mg de tejido por pocillo) y se realizaron varios lavados más con KRH hasta que el tejido estuvo totalmente limpio. Los fragmentos de tejido se colocaron en placas de 6 pocillos a las que se añadieron 2.5 ml de medio DMEM suplementado con bicarbonato sódico (3.7 g/l), glutamina (2mM), piruvato sódico (1mM),p enicilina (100 U/ml), estreptomicina (100 ug/ml) y suero fetal de ternera (0.5%). Tras un período de incubación de 24 horas a 37º C en un incubador de CO2 con un autocalibrado periódico (HERAEUS), bajo una atmósfera humidificada de 95% aire - 5% CO2, se aspiró el medio y se añadieron 2.5 ml de medio de cultivo fresco a cada pocillo,