Desarrollo de métodos de extracción y análisis de ficotoxinas en mariscos

Abstract

Las ficotoxinas marinas son producidas por algas unicelulares de fitoplancton. Uno de los grupos de ficotoxinas con mayor revelancia en Europa son las toxinas diarreicas ó DSP(iniciales del ingles Diarrhetic Shellfish Poisoning). Estan representadas principalmente por el acido okadaico (OA),DTX-1 y DTX-2 y provocan transtornos gastrointestinales en los seres humanos por ingestion de mariscos contaminados. En esta tesis se presenta un metodo especifico y optimizado de preparación de muestra para la determinación por HPLC de toxinas DSP tras la derivatización fluorescente con bromoacetilpireno, que permite aprovechar las ventajas de estabilidad quimica, velocidad de reacción, precio y coste que tiene este reactivo en comparación con el reactivo habitual, el antracildiazometano. Posteriormente se desarrollado una modificación del metodo de determinación de toxinas diarreicas por HPLC y fluorescencia que permite evitar totalmente el uso de disolventes clorado tóxicos. El metodo ha sido validado para la toxina ácido okadaico y además, se ha sometido a una validación externa mediante la participación en un ejercicio interlaboratorio, ofreciendo resultados de una calidad comparable al metodo original. A continuacion se ha estudiado la aplicación de la tecnología de fluidos supercriticos en aspectos tecnologicos y analiticos relacionados con los mariscos contaminados con toxinas DSP comenzando con la determinación de la solubilidad de la toxina OA. Los resultados demuestran que el acido okadaico es soluble en CO2 supercritico modificado y se propone su utilizacion en la purificación de la toxina y en la automatizacion del proceso de preparación de muestra previo al analisis intrumental. Se desarrolló tambien un modelo matematico que es capaz de correlacionar la solubilidad de numerosas sustancias en fluidos supercriticos modificados. Por ultimo se describe la eliminacion e inactivacion de la toxina OA en una atmosfera superc