Papel de la dnasa i en la fisiopatogenia del lupus eritematoso sistemico

Abstract

El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune crónica caracterizada por una gran variedad de manifestaciones clínicas y la producción de autoanticuerpos frente a antígenos intracelulares ubicuos. Su etiología es compleja y desconocida, con un componente de predisposición genética importante. Diversos estudios han mostrado la implicación de genes que intervienen en la eliminación de restos apoptóticos, entre los que se encuentra el gen DNASA1. El trabajo de Chitrabamrung et al. mostró, hace ya dos décadas, una disminución significativa de la actividad DNasa I en el suero de pacientes con LES. Más recientemente, se describió como ratones deficientes en el enzima DNasa I desarrollaban síndrome tipo lupus y se identificó la mutación 172A>T en la secuencia codificante del gen DNASA1, que originaba una proteína no funcional, en dos niñas japonesas con LES. Esta mutación se asoció en ambos casos con una disminución significativa de la actividad Dnasa I en suero y con títulos elevados de anticuerpos anti-DNA de doble cadena (dsDNA) y anti-nucleosomas. Sin embargo, el análisis posterior de distintas series de pacientes con LES en distintas poblaciones mostró que se trataba de una mutación muy rara. El objetivo general de este estudio fue analizar el papel de la DNasa I en un grupo de pacientes españoles con LES. En concreto, se determinó la actividad DNasa I, mediante enzimodifusión radial (SRED), en el suero de 68 pacientes con LES y en varios grupos control, observándose una disminución significativa de la misma en pacientes con lupus. Además, mediante secuenciaciación y clonado en el vector pCR 2.1, se identificaron dos pacientes con LES con actividad enzimática muy disminuida portadoras de tres nuevas mutaciones en la secuencia codificante del gen DNASA 1, la delección 46_72del y las transiciones puntuales +1760G>A y +1785C>T. Estas mutaciones parecen responsables de la alteración funcional del enzima. Sin embargo, el análisis de las mismas en una población más amplia mostró que su frecuencia alélica era inferior al 1% tanto en los pacientes con LES como en la población en general. Por otro lado, se observó una tendencia hacia una correlación inversa entre la actividad DNasa I en suero y la respuesta de autoanticuerpos antinucleares, determinados mediante ELISA; aunque esta correlación fue sólo estadísticamente significativa en el caso de los pacientes con LES que presentaron anticuerpos anti-dsDNA. Estos resultados han proporcionado consistente evidencia de la implicación de la DNasa I en la patogenia del lupus. Sin embargo, no se habían descrito polimorfismos frecuentes en DNASA1 implicados en la patogenia de la enfermedad hasta un artículo reciente en pacientes con LES coreanos. Ese trabajo mostró asociación entre el SPN +2373A>G (Gin2344Arg) y la producción de anticuerpos anti-ribonucleoproteínas (anti-RNP) y anti-dsDNA, aunque no con la susceptibilidad a la enfermedad. El estudio de dicho polimorfismo en nuestra población (276 pacientes con LES y 368 controles sanos españoles) mostró asociación, siguiendo un modelo genético recesivo, entre el genotipo GG del SNP Gln244Arg (rs 1053874) y la susceptibilidad al LES (p=0.002). Sin embargo, dicho genotipo no se correlacionó con la actividad DNasa I en suero ni con la respuesta humoral antinuclear en los pacientes con LES. Por otro lado, puesto que las mutaciones identificadas en DNASA1 eran muy raras y no parecían responsables de la baja actividad enzimática observada en la mayoría de los pacientes con lupus, buscamos nuevos polimorfismos en el locus DNASA1, incluyendo 2900 pb de la región flanqueante 5¿. Cuatro de los polimorfismos identificados en regiones no codificantes de la DNASA1 (-1799G>A, -637G>A, -16C>T y +2035C>G) fueron analizados en una colección de 287 pacientes con lupus y 452 controles sanos españoles, pero sólo el alelo G del SNP +2035C>G (rs 1799892), localizado en el intrón 7 del gen, se asoció con la susceptibilidad al LES (p=0.014). Sin embargo, el genotipo GG de dicho SNP no se correlacionó con la actividad DNasa I ni con la producción de anticuerpos antinucleares en suero de pacientes con LES. Además, se observó un fuerte desequilibrio de ligamiento entre el SNP +2035C>G y el polimorfismo común de la DNASA1, +2373A>G, estudiado previamente; pero el análisis de la distribución de las frecuencias haplotípicas indicó que el mejor candidato como factor de susceptibilidad al LES sigue siendo el SNP +2373A>G (Gin244Arg).