Evaluación in vivo de la sustantividad de la clorhexidina al 0,2% en diferentes ecosistemas orales

Resumo

La placa dental se considera un modelo especializado de biofilm microbiano, que se forma sobre todos los tejidos intraorales duros y blandos, y representa el principal agente etiológico de la caries y de la enfermedad periodontal. La idea de aplicar un antiséptico oral con fines profilácticos exige analizar su eficacia antimicrobiana en diferentes ecosistemas orales, particularmente en los que presentan características estructurales y fisiológicas diferentes a la saliva, como es el caso de la placa dental. El estudio in vivo de la actividad antibacteriana de un antiséptico supone el análisis de su efecto inmediato y de su sustantividad. Se ha demostrado que la clorhexidina tiene un efecto antibacteriano inmediato y una mayor sustantividad in vivo que otros antisépticos empleados en la cavidad oral. En la mayoría de las series publicadas, la cuantificación de la actividad antimicrobiana de la clorhexidina en saliva se realizó empleando técnicas microbiológicas de cultivo en placa. Sin embargo, algunos autores cuestionaron la fiabilidad de estas técnicas y, como alternativa, propusieron el uso de ensayos fluorescentes que utilizan fluorocromos específicos para marcar bacterias viables y no viables, en base a la integridad de su membrana citoplasmática. Los objetivos planteados en la Tesis fueron los siguientes: 1. Evaluar la actividad antimicrobiana in vivo de la clorhexidina sobre la flora salival hasta 7 horas después de su utilización, aplicando una técnica de microscopía de epifluorescencia. 2. Analizar el efecto in situ de un enjuague de clorhexidina sobre la viabilidad de las bacterias que conforman la placa dental, comparando los resultados con los obtenidos en la flora salival. Para poder estudiar íntegramente este biofilm sin desestructurarlo ni alterar su arquitectura, recurrimos al microscopio de barrido láser confocal. 3. Evaluar la influencia del ritmo circadiano en la viabilidad bacteriana de la flora salival y de la placa dental hasta 12 horas después de la aplicación de un único enjuague de clorhexidina. Para ello, se recogieron muestras de saliva y biofilm de placa dental formado sobre discos de vidrio alojados en férulas que portaban voluntarios durante 48 horas. Las muestras se analizaron mediante la tinción de fluorescencia LIVE/DEAD® BacLight¿ (que tiñe las bacterias viables en verde y las no viables en rojo), empleando microscopía de epifluorescencia en el caso de la saliva y microscopía de barrido láser confocal para las muestras de biofilm. Los resultados obtenidos nos permiten concluir que: 1. La microscopía de epifluorescencia con la solución LIVE/DEAD® BacLight¿ es un método eficaz que permite la cuantificación en ¿tiempo real¿ de la viabilidad bacteriana de la flora salival y que podría resultar particularmente útil para evaluar el efecto de determinados agentes antimicrobianos en diferentes ecosistemas orales simultáneamente. 2. El biofilm de placa dental ¿no desestructurado¿ de 48 horas de evolución es más resistente que la flora salival a la acción antibacteriana inmediata de un único enjuague de clorhexidina al 0,2%. Sin embargo, la sustantividad de la clorhexidina en el biofilm de placa dental es mayor que en la saliva, lo que confirma el ritmo de crecimiento especialmente lento y la posible influencia de la arquitectura abierta del biofilm de novo. 3. Tras la aplicación de un único enjuague de clorhexidina al 0,2%, la viabilidad bacteriana de la flora salival se recupera progresivamente, aunque es más eficaz la práctica de un enjuague nocturno. En el biofilm de placa dental la viabilidad bacteriana se recupera hasta 3 horas después del enjuague y después se mantiene constante al menos hasta 12 horas, independientemente del momento de aplicación del enjuague. Estos resultados corroboran el mayor dinamismo fisiológico de la flora salival y la posible ¿función reservorio¿ del biofilm de novo. Estas conclusiones pueden contribuir a optimizar los protocolos de administración de antisépticos, especialmente en situaciones clínicas en las que se persigue una reducción significativa de la carga bacteriana durante un corto período de tiempo, como la prevención de complicaciones infecciosas tras un procedimiento odontológico. Palabras clave: biofilm oral, clorhexidina, sustantividad, microscopio de barrido láser confocal, microscopía de epifluorescencia.