Análisis del proteoma de suero humano para la identificación de proteínas con utilidad clínica en el cáncer colorrectalestudio proteómico de las isoformas de clusterina

Resumen

El cáncer colorrectal (CCR) constituye una de las neoplasias más frecuentes. Sin embargo, en la actualidad no existen buenos marcadores tumorales para su diagnóstico y pronóstico. Por ello, en este trabajo se han empleado metodologías proteómicas y bioquímicas, con el fin de detectar marcadores tumorales séricos de utilidad. En primer lugar, se empleó un método de prefraccinamiento mediante cromatografía de afinidad a través de Concanavalina A, analizando la fracción de N-glicoproteínas, ya que éstas presentan numerosas alteraciones en la carcinogénesis. Mediante electroforesis bidimensional, se estudiaron los patrones proteicos a través de tres aproximaciones distintas. La primera permitió detectar 72 proteínas con niveles alterados en CCR, 37 incrementadas. Entre ellas, se incluyeron proteínas relacionadas con la apoptosis (clusterina), y la transducción de señales (LRG), de gran interés como potenciales marcadores para el CCR. La segunda aproximación consiste en utilizar los patrones proteicos bidimensionales como herramienta diagnóstica. Empleando el análisis de componentes principales y el análisis discrimianate, se pudo establecer un patrón de expresión diferencial, que permite el diagnóstico de un individuo. La tercera aproximación es la detección de cambios en la posición relativa de proteínas en mapas bidimensionales, que reflejan variaciones en el punto isoeléctrico y la masa molecular. Mediante el análisis de deformaciones relativas, se detectaron variaciones significativas en la posición de N-glicoproteínas séricas de pacientes con CCR, permmitiendo además la discriminación entre individuos sanos y enfermos, y la detección de la contribución de cada proteína. A partir de las proteínas con niveles alterados se seleccionó la clusterina, con el fin de estudiar sus diversas formas séricas, y comparar su distribución y niveles en el suero de individuos sanos y de pacientes con C