Estudio de los genes KIPDCB y KIGSK-3 de la levadura "Kluyveromyces lactis"

Abstract

En el presente trabajo se ha secuenciado una region de 5kb de DNA del cromosoma seis de la levadura kluyveromyces lactis, en la que se han identificado dos pautas de lectura abierta, las cuales se han subclonado y se ha realizado su analisis funcional. La predicción de función basada en homologías respecto a secuencias recopiladas en las bases de datos puso de manifiesto que uno de los genes (KLPDCB), de bajo nivel de expresión, posee una gran similitud con piruvato descarboxilasas de distintos origenes, mientras que el otro (KLGSK-3) pertenece a una familia de protein-quinasas. Se han interrumpido ambos genes siendo los fenotipos mas caracteristicos mostrados por los mutantes nulos: En el primer caso, disminucion drastica del crecimiento en medios carentes de tiamina, en el segundo, ausencia de crecimiento en glucosa y etanol a 37 grados C. Y disminucion del almacenamiento de glucogeno. Tambien se han realizado analisis de la secuencia de los promotores asi como analisis de expresion mediante northern-blot, rt-pcr y fusiones a genes marcadores, todo ello acompañado de una exhaustiva revision bibliografica.