Elementos cis y factores trans de procesamiento alternativo de RNAs en levaduras

Resumo

La tesis supone un avance en el conocimiento de los mecanismos de poliadenilación alternativa en la levadura Saccharomyces cerevisiae. Este es un proceso conservado y regulado en todos los eucariotas y poco conocido. Empleamos el gen KlCYCl de Kluyveromyces lactis como modelo de estudio, puesto que las posiciones de procesamiento alternativo están conservadas al expresar el gen en S. cerevisiae. Se comprueba que los dominios proximal y distal de la región 3 ' - UTR son eficientes como regiones terminadoras independientes e identificamos los elementos reguladores presentes en cada uno de ellos comprobando que además interacción entre si. El elemento rico en AU (posición 670-694) del domino proximal es importante para determinar la eficiencia y posición del procesamiento 3 ' regular la estabilidad de los transcritos y la interacción con factores de procesamiento 3 ' Se muestra cómo que los factores Pta1, Rna15, Pcf11 y Fip1 afectan al procesamiento 3' alternativo. Demostramos así un papel que no había sido descrito previamente para ningún gen eucariota. La expresión de distintos dominios de la región 3' -UTR de KlCYC1 permite alterar los patrones de expresión génica en un proceso independiente del promotor y alterar el metabolismo respiro-fermentativo en K. lactis. En esta especie la predominancia de las posiciones de poliadenilación alternativa se regula en función de la fase de cultivo. Mediante microarrays de DNA identificamos factores transcripcionales y de la maquinaria de procesamiento 3' que se regulan en función de la fase de cultivo, estos resultados permiten proponer un modelo según el cual diferentes maquinarias de procesamiento 3' que se regulan en función de la fase de cultivo, estos resultados permiten proponer un modelo según el cual diferentes maquinarias de procesamiento 3 ' actúan sobre las diferentes posiciones alternativas de corte y poliadenilación dependiendo de los cambios en la fase de cultivo.