Infertilidad masculinaaspectos morfofuncionales y genéticos del espermatozoide

Resumen

Se evalúan diferentes técnicas de microscopía óptica, microscopía electrónica y genética molecular (DBD-FISH) con el objeto de su validación en los estudios de infertilidad masculina humana. Por primera vez se demuestran estructuras de genes de ADNr en espermatozoides maduros mediante técnicas de impregnación argéntica (NOR). Se comprueba que no se producen modificaciones de la posición de la cromatina del espermatozoide durante su maduración. A nivel ultraestructural, se aplica de forma novedosa un método de estudio ultraestructural (Whole-mounting"") mediante microscopía electrónica de transmisión al estudio de espermatozoides maduros. Esta metodología consigue la visualización del espermatozoide íntegro, reduciendo en costes y tiempo de realización entre 20 y 52 veces respectivamente con respecto a la microscopía electrónica de tansmisión clásica. Proprociona además la detección de patología ultraestructural no visible mediante microscopía óptica. Otra aplicación del citado, método, permite la evaluación funcional mediante HOS-Test, demostrando que la alteración morfológica que se produce en las colas del espermatozoide es debida a un en rollamiento de la cola en lugar de un edema de membrana como se afirmaba. El método del DBD-FISH (Dna Breakage Detection by Fluorescence In Situ Hybridization), se aplica por primera vez a espermatozoides humanos, demostrándose como una técnica flexible y útil, no solo para la detección de ADN dañado en secuenicas específicas o en el genoma entero, si no también para revelar características peculiares de la estructura de la cromatina empaquetada mediante histonas: Palabras claves: espermatozoide, genes NOR, microscopía electrónica, HOS-Test, cromatina, DBD-FISH.