Caracterización bioquímica de las DNA toposiomerasas de tipo II de Streptococcus pneumoniae
- Adela M. González de la Campa Director
Defence university: Universidad Autónoma de Madrid
Fecha de defensa: 07 May 2001
- Manuel Espinosa Padrón Chair
- Miguel Remacha Moreno Secretary
- Antonio Tormo Garrido Committee member
- José Berenguer Carlos Committee member
- María del Rosario Muñoz Moreno Committee member
Type: Thesis
Abstract
En España hay un 50% de cepas de de S.pneumoniae resistentes a penicilina. Las fluoroquinolonas (Fqs) son un grupo de antimicrobianos alternativos para el tratamiento de las infecciones causadas por esta bacteria. Los blancos de las Fqs son las DNA topoisomerasas de tipo II (DNA girasay topoisomerasa IV), enzimas esenciales para la viabilidad celular que controlan la topologia del DNA. Para determinar cúal de estas enzimas es el blanco primario para estos compuestos, clonamos, superproducimos y purificamos por separado mediante cromatografia las subunidades GyrA y GyrB de la DNA girasa y ParC y ParE de la topoisomerasa IV. Reconstituimos las enzimas a partir de sus subuinades. Establecimos un ensayo de superenrrollamiento de DNA mediado por girasa y otro de decatenación de kDNA mediado por topoisomerasa IV. Probamos la potencia inhiboria de cuatro Fqs representativas sobre estos ensayos. Estos experimentos permitieron determinar bioquimicamente que la topoisomerasa IV es el blanco primario de la Fqs en S.pneumoniae. Asimismo se clonó superprodujo y purificó mediante colas de histidinas el dominio amino terminal de GyrA, el cual posee el sitio activo de la enzima en concentración y pureza suficiente para su cristalización. Este dominio presento actividad de rotura de doble cadena en presencia de Fqs cuando se acompleja con GyrB.