Caracterización genética de retinopatías humanasenfermedad de best, síndrome de bardet-biedl y síndrome de alström

Resumo

Las distrofias hereditarias de retina (DR) engloban un amplio número de patologías caracterizadas por la lenta y progresiva degeneración de la retina. Están causadas por la afectación primaria de los fotorreceptores y se caracterizan por su elevada heterogeneidad, tanto genética como clínica. Se pueden presentar asociadas a patologías extraoculares, son las denominadas formas sindrómicas, como el Síndrome de Bardet-Biedl (BBS) o el Síndrome de Alström (AS); aunque más frecuentemente (85-90% de los casos) representan un trastorno aislado [(Chizzolini et al., 2011)], un ejemplo de este último grupo es la Enfermedad de Best (BVMD) y la Bestrofinopatía autosómica recesiva (ARB). Aunque las DR pertenecen al grupo de enfermedades raras, es posible que afecten a más de dos millones de personas en todo el mundo (Berger et al., 2010). Así, las prevalencias estimadas son de 4,4:100.000 para la BVMD, 0,8:100.000 para el BBS y 0,14:100.000 para el AS (http://www.orpha.net/, noviembre de 2012). Su diagnóstico resulta complicado debido a su gran heterogeneidad clínica y genética. Actualmente se han identificado 192 genes responsables y se han localizado 232 loci asociados a distintas formas de DR (https://sph.uth.tmc.edu/Retnet/, abril de 2013). Para confirmar el diagnóstico y ayudar al consejo genético de los afectos de DR, el objetivo principal del presente trabajo ha sido caracterizar genéticamente a familias españolas afectas de BVMD, BBS y AS. Se incluyeron un total de 39 familias: 2 BVMD, 1 ARB, 5 AS, 30 BBS y 1 que mostraba un fenotipo que podría coincidir con el de AS (AS-like). En primer lugar, se llevó a cabo el estudio molecular de las familias BVMD y ARB mediante un microarray de genotipado específico, no detectándose ninguna mutación. Tras la secuenciación directa del gen implicado en estas patologías (BEST1), se consiguieron detectar dos alelos mutados en la familia ARB y un alelo mutado de patogenicidad dudosa en una de las familias BVMD. En segundo lugar, se realizó el estudio molecular de los pacientes AS y del paciente AS-like mediante otro microarray de genotipado específico para ¿BBS-AS", no lográndose identificar ningún alelo mutado. Mediante la secuenciación directa de los exones del gen ALMS1 con mayor carga mutacional en el AS (exones 8, 10 y 16), se consiguieron detectar tres de los 5 pacientes con AS, con al menos un alelo mutado, lo que supone una tasa de detección del 50% (5/10 alelos). Sin embargo, en el paciente AS-like no se detectó ninguna mutación. Debido al solapamiento fenotípico entre el AS y el BBS, se incluyeron en el estudio 4 pacientes de BBS con sospecha clínica de padecer AS, aunque no se detectó ninguna mutación. Se analizó además, la presencia del alelo 229T (c.685G>A) del gen modificador RPGRIP1L en nueve de los diez pacientes, resultando heterocigoto para este alelo únicamente el afecto de la familia GBB11. Así, la frecuencia alélica de 229T en los pacientes estudiados fue de 5,56% (1/18 alelos) y no se encontraron diferencias significativas en la frecuencia de este alelo entre los pacientes estudiados y 52 controles (p=0,38320). En tercer lugar, el estudio molecular de los pacientes BBS (con resultado negativo previo para un microarray de genotipado específico ¿BBS-AS¿) consistió en el análisis del gen con mayor prevalencia mutacional en nuestra población: BBS10. La secuenciación directa de este gen permitió detectar dos alelos mutados en una familia y otro en una segunda, lo que supone una tasa de detección del 5% (3/60 alelos). Por tanto, de las treinta familias estudiadas, se detectó al menos un alelo mutado en tres de ellas (10%). De manera global, tras la secuenciación de los correspondientes exones y genes implicados en las correspondientes familias, se consiguieron caracterizar 5 de ellas (12,82%): una con BVMD, una con ARB, dos con AS y una con BBS. La tasa global de detección para estas tres DR fue de un 14,47% (11/76 alelos). Por último, se estudiaron los datos fenotípicos de los pacientes de BBS con objeto de establecer una correlación genotipo-fenotipo que permitiese proporcionar un apropiado consejo genético a las familias afectadas. El bajo número de alelos mutados identificados, junto con el pequeño tamaño muestral, limitó la a aplicación del análisis estadístico y finalmente no fue posible establecer ninguna correlación genotipo-fenotipo. Para optimizar el estudio genético de nuestros pacientes con BBS y AS, proponemos un algoritmo que determina el mejor abordaje coste-efectivo para su diagnóstico molecular. En el caso de BBS el primer paso consiste en testar la mutación de gran prevalencia en nuestra población p.M390R (BBS1). A continuación, se realiza la aplicación conjunta de un microarray de genotipado específico para BBS y AS, así como el cribado de los exones con mayor carga mutacional en el gen ALMS1 (pacientes de AS) o del gen con mayor prevalencia mutacional en nuestra población (pacientes de BBS). Esta estrategia se combina con otras como el mapeo de homocigosidad.