Estudio molecular de la aniridia y otras malformaciones oculares congénitasbúsqueda de nuevos mecanismos genéticos

Resumen

Hace casi tres décadas se identificó la causa genética de la aniridia, siendo PAX6 el principal gen implicado hasta el día de hoy. Sin embargo, los estudios rutinarios de diagnóstico genético solo permiten obtener resultados concluyentes en <75% de los pacientes de una cohorte recopilada en el Hospital Universitario Fundación Jiménez Díaz. A la vista de estos datos se sospecha que puedan existir otras causas o mecanismos genéticos todavía sin identificar entre los casos considerados “PAX6 negativos”, lo que ha constituido el principal objetivo de esta Tesis Doctoral. Gracias al desarrollo de nuevas tecnologías personalizadas de secuenciación masiva y arrays de CHG, en este trabajo hemos ampliado el estudio genético a otras regiones del locus de PAX6 habitualmente no estudiadas de forma rutinaria, incluyendo UTRs, intrones y enhancers, así como otros genes asociados a formas fenotípicas solapantes. Se han detectado microdeleciones afectando a los enhancers de PAX6, lo que ha permitido acotar una región crítica para su regulación transcripcional. Asimismo, se han detectado variantes en el 5'UTR de PAX6. También hemos podido detectar variantes patogénicas en otros genes, FOXC1 y PITX2, en el 4% de la cohorte. Por otro lado, hemos profundizado en la implicación de las variantes de significado clínico incierto en PAX6 identificadas en nuestra cohorte. Nos hemos centrado en el estudio de variantes no codificantes, principalmente localizadas en el 5'UTR, en sitios no canónicos de splicing y variantes sinónimas. Para ello, se han realizado estudios de modelización in vitro utilizando minigenes para valorar posibles alteraciones del splicing, lo que ha permitido la reclasificación patogénica de 10 variantes. Por último, este trabajo ha confirmado por primera vez la existencia de mosaicismo gonosomal de origen parental como causa de un patrón de trasmisión inusual y/o variabilidad fenotípica en 4 familias con aniridia u otros fenotipos asociados a PAX6, lo cual tiene importantes implicaciones en el consejo genético. Finalmente, este estudio de Tesis Doctoral ha permitido la detección de nuevos mecanismos genéticos implicados en la aniridia con un consiguiente aumento del rendimiento de diagnóstico genético en un 20%, llegando así al 84% de casos en los que se ha podido identificar una variante claramente patogénica.