Cuantificación del quimerismo hematopéyico en pacientes con leucemias sometidos a trasplante alogénico de médula ósea

Abstract

EL PRESENTE TRABAJO SE HA CENTRADO EN LA BUSQUEDA DE POLIMORFISMOS, REVELADOS MEDIANTE LA DIGESTION IN SITU CON ENZIMAS DE RESTRICCION, QUE PERMITIERAN LA DIFERENCIACION DE CELULAS DE DONANTE Y RECEPTOR EN UN TRASPLANTE DE MEDULA OSEA CON EL FIN DE CUANTIFICAR EL QUIMERISMO HEMOPOYETICO EN EL PACIENTE TRASPLANTADO. EN CONCRETO, TRAS DIGESTION IN SITU CON EL ENZIMA DE RESTRICCION SAU3A SE OBTIENE UN PATRON DE BANDAS EN EL QUE UNICAMENTE SE RECONOCEN SIN DIGERIR LAS REGIONES PERICENTROMERICAS DE LOS CROMOSOMAS 3 Y 9. ADEMAS, DICHO ENZIMA DE RESTRICCION PONE DE MANIFIESTO UN POLIMORFISMO EN LA HETEROCROMATINA CONSTITUTIVA DEL CROMOSOMA 3, DANDO LUGAR A TRES POSIBLES CARIOTIPOS: 3++, 3+- Y 3--. EL REDUCIDO NUMERO DE REGIONES RESISTENTES A LA DIGESTION HACE POSIBLE QUE EL POLIMORFISMO PUEDA SER IDENTIFICADO NO SOLO EN CELULAS EN METAFASE, SINO TAMBIEN EN NUCLEOS INTERFASICOS. LA DIGESTION IN SITU CON SAU3A, POR TANTO, SE HA MOSTRADO MUY UTIL PARA CUANTIFICAR EL QUIMERISMO EN AQUELLOS PACIENTES TRASPLANTADOS QUE MOSTRABAN UN PATRON DE DIGESTION DEL CROMOSOMA 3 DISTINTO AL DE SUS DONANTES (25% DE LOS CASOS SEGUN LA MUESTRA DE 24 PACIENTES ANALIZADA). ASIMISMO, PERMITE EL ESTUDIO CUANTITATIVO DEL QUIMERISMO EN LOS CASOS EN QUE DONANTE Y RECEPTOR SON DEL MISMO SEXO Y NO SE DISPONE, POR TANTO, DE LOS CROMOSOMAS SEXUALES COMO MARCADORES PARA IDENTIFICAR EL ORIGEN DE CADA CELULA EN LA MEDULA OSEA DEL PACIENTE TRASPLANTADO. PARALELAMENTE SE HA CARACTERIZADO EL POLIMORFISMO REVELADO EN LA HETEROCROMATINA PERICENTROMERICA DEL CROMOSOMA 3 DESDE UN PUNTO DE VISTA CITOGENETICO Y MOLECULAR, EVALUANDO LA PARTICIPACION DE DISTINTAS FAMILIAS DE ADN SATELITE. PARA ELLO SE HAN LLEVADO A CABO EXPERIMENTOS DE HIBRIDACION IN SITU FLUORESCENTE UTILIZANDO COMO SONDA DIFERENTES FAMILIAS DE SECUENCIAS, INCLUIDOS LOS ADN SATELITES QUE OCUPAN LA REGION PERICENTROMERICA DEL CROMOSOMA 3 (ALFOIDE Y SATELITE 1), SOBRE CROMOSOMAS CONTROL Y PREVIAMENTE DIGERIDOS CON