Bioprospecting for Novel Thermozymes in Metagenomic Libraries from Hot Springs

  1. Escuder Rodríguez, Juan José
Supervised by:
  1. María-Isabel González-Siso Director
  2. Manuel Becerra Director

Defence university: Universidade da Coruña

Fecha de defensa: 17 December 2021

Committee:
  1. María Luisa Rúa Rodríguez Chair
  2. Ángel Vizoso-Vázquez Secretary
  3. María Florencia Eberhardt Committee member

Type: Thesis

Teseo: 700223 DIALNET lock_openRUC editor

Abstract

En la presente tesis doctoral se ha estudiado el metagenoma de dos fuentes termales localizadas en la ciudad de Ourense (Galicia, España): As Burgas y Muiño da Veiga. Los objetivos principales fueron la identificación y la caracterización bioquímica de enzimas termófilas y termotolerantes (termozimas) codificadas en dichos metagenomas y con posible utilidad biotecnológica, así como la secuenciación de uno de estos metagenomas para estudiar la composición de la comunidad microbiana y sus posibles interacciones metabólicas. Además, el estudio de la secuencia de ADN ha permitido realizar predicciones y búsquedas de nuevas termozimas, expandiendo el alcance de la técnica para la bioprospección de estos catalizadores con interés biotecnológico. Objetivos 1. Construir metagenotecas a partir del ADN ambiental extraído de muestras de dos aguas termales de la región de Ourense: As Burgas y Muiño da Veiga. 2. Realizar cribados funcionales con las metagenotecas para identificar actividades enzimáticas de interés usando sustratos específicos. 3. Secuenciar, clonar, expresar y purificar una enzima con actividad lipolítica para realizar predicciones a partir de su secuencia y para su caracterización bioquímica. 4. Secuenciar el metagenoma de la muestra de Muiño da Veiga para realizar un análisis bioinformático que permita describir la comunidad microbiana y sus interacciones metabólicas. 5. Analizar el metagenoma secuenciado para identificar termozimas que puedan ser clonadas y expresadas en el laboratorio. 6. Clonar, expresar y purificar una β-xilosidasa y una endoglucanasa predichas por el análisis de secuencia para realizar una caracterización bioquímica y confirmar su potencial biotecnológico.