Detection of recombinant human Erythopoietin and analogues through immunorecognition and n-glycolyl-neuraminic acid identification

Resumo

La eritropoyetina (EPO) es una hormona glicoproteica formada por una cadena peptídica de 165 aminoácidos que contiene dos puntos disulfuro, un O-glicano (Ser-126) i tres N-glicanos (Asn-24, 38, 83) que representan alrededor de un 40% de su masa molar (~ 30kDa). Se produce principalmente en el riñón, en respuesta a la reducción de oxigeno en el tejido, y estimula la eritropoyesis a la médula ósea. La EPO recombinante (rhEPO) se administra como fármaco por el tratamiento de diferentes enfermedades. También se ha observado su utilización en deportistas con el objetivo de aumentar los niveles de oxigeno en los tejidos y así incrementar su rendimiento. Los métodos que se utilizan para diferenciar la EPO urinaria endógena de la exógena se basan en diferencias de sus perfiles isoelectroforéticos (IEF) o en sus pesos moleculares (SDS-PAGE). El problema de estos métodos es que son largos, costosos y solo pueden utilizar la orina como matriz biológica. En este estudio, se ha realizado el desarrollo de los siguientes métodos que facilitan la detección de EPOs recombinantes y análogos en el control antidopaje: Un método de immunopurificación de EPO en plasma; un método de cribado rápido basado en técnicas de immunoafinidad para detectar el abuso de eritropoyetinas recombinantes en orina; y un método de cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masa que permite detectar una clara diferencia estructural entre la mayoría de las EPOs exógenas y la endógena, el Neu5Gc.